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PCR은 많은 질병의 진단에 사용 된 검사입니다. PCR 방법은 유기체, 특히 DNA에서 박테리아의 직접적인 존재를 보여줄 수 있습니다. 특히 PCR 검사가 사용됩니다. 라임 병 진단에. PCR 기술은 무엇입니까? Real Time PCR이란 무엇입니까?
목차 :
- PCR (테스트)-PCR 기술이란 무엇입니까?
- PCR (연구)-PCR 법 적용
- PCR (연구)-라임 병
- PCR (연구)-결과. 거짓 양성일 수 있습니까?
- PCR (연구)-결과. 거짓 음성 일 수 있습니까?
PCR (중합 효소 연쇄 반응)은 유전 및 분자 실험실에서 사용되는 기본 방법입니다. 그것은 1993 년에 노벨상을 수상한 Kara Mullis에 의해 1983 년에 개발되었습니다.
PCR 기술이 무엇인지 들어보십시오. 이것은 LISTENING GOOD 사이클의 자료입니다. 팁이있는 팟 캐스트.
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PCR (테스트)-PCR 기술이란 무엇입니까?
PCR 테스트는 중합 효소 효소를 사용하여 특정 DNA 단편 (예 : Borrelia 단백질을 코딩하는 유전자)의 다중 증폭 (일반적으로 30-40주기)으로 구성됩니다.
그런 다음 특수 분자 염료를 사용하여 증폭 된 DNA 조각을 가시화합니다. 특정 DNA 단편의 증폭으로 인해 PCR은 매우 민감한 방법입니다.
PCR 방법에서 DNA 단편은 박테리아 DNA의 특정 영역에 대한 특정 프라이머 쌍을 사용하여 증폭됩니다. 예를 들어, 라임 병 진단에 사용되는 PCR의 표적 영역은 단백질을 코딩하는 유전자입니다. 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA.
테스트를 수행 할 수있는 생물학적 재료는 다음과 같습니다.
- 피의
- 이동성 홍반의 피부 부분
- 뇌척수액
- 활액 또는 관절 연골에서
- 오줌
PCR (연구)-PCR 법 적용
PCR 법을 이용한 라임 보렐리 시스 진단 이외에도 다른 미생물이나 인간의 특정 DNA 단편을 검출 할 수 있습니다. 따라서 PCR 방법은 다음에서도 사용됩니다.
- 바이러스 감염 진단 및 모니터링 : 헤르페스 바이러스 (헤르페스 바이러스, 대상 포진, Epstein-Barr, 거대 세포 바이러스), HIV, 간염 바이러스 (HBV 및 HCV)
- 세균 감염, 특히 배양을 통해 식별 할 수없는 세균 (예 : 결핵)의 진단 및 모니터링
- 종 양성 질환의 진단 및 모니터링 : 백혈병, 유방암, 대장 암, 폐암
- 암 소인 진단 : 유방암 및 난소 암 (BRCA1 및 BRCA2 유전자), 대장 암 (APC 및 CHEK2 유전자)
- 유전 질환 진단 : 혈색소 침착증 (HFE 유전자), 지중해 빈혈 (HBA1 및 HBA2 유전자), 체강 질환 (HLA 유전자)
- 아이와 아버지의 DNA 호환성을 확인하는 친자 확인 검사
현재 PCR 방법에는 많은 수정이 있습니다. 예를 들어 라임 보렐리 증의 진단에는 주로 중첩 PCR과 실시간 PCR이 사용됩니다. 후자는 정량적 방법이며 테스트 된 생물학적 물질에서 Borrelia DNA 사본의 정확한 수를 결정할 수 있습니다.
PCR (연구) 및 라임 병
혈청 검사는 라임 병 진단의 기초입니다. 그러나 이러한 검사가 위음성을 유발할 수있는 임상 상황이 있습니다.
- 혈청 학적 창, 즉 신체가 아직 Borrelia spirochetes에 대한 특정 IgM 및 IgG 항체를 생성하지 않는 초기 감염 기간
- 충분한 항체를 생산하지 않는 면역 결핍 환자
- Borrelia 항원과 특정 항체로 구성된 면역 복합체의 존재, 혈청 학적 방법에 의한 항체 검출 방지
환자에게서 라임 병의 증상이 의심되고 혈청 학적 검사 결과가 음성이면 PCR 법에 의한 분자 검사를 수행 할 수 있습니다.
Borrelia spirochetes의 DNA는 체액의 spirochetes 수가 가장 많기 때문에 감염 초기 단계에서 검출 될 수 있습니다.
라임 보렐리 증의 진단에는 ELISA와 같은 혈청 학적 방법이 주로 사용되지만 일부 임상 상황에서는 PCR 방법을 사용한 유전자 검사가 도움이됩니다.
감염 후 시간이 길수록 박테리아 DNA를 발견 할 가능성이 낮아집니다. 따라서 경우에 따라 PCR 검사를 수행하기 전에 특수 배지에서 1 ~ 2 주 동안 박테리아를 배양 한 다음 검사를 수행합니다.
이 접근법은 라임 병이 의심되고 뇌척수액을 채취 한 경우에 사용됩니다. 감염 후기에는 ELISA 검사를 수행하는 것이 더 적절합니다.
PCR 방법은 폴란드에서 Borrelia burgdorferi 품종의 발생에 대한 표준화가 부족하기 때문에 Lyme borreliosis의 일상적인 진단에 사용해서는 안됩니다.
그러나 진단에 어려움이있는 경우 (특히 질병 초기) PCR 검사 결과가 진단 과정에 도움이됩니다.
양성 검사 결과는 Borrelia burgdorferi DNA와 그 변종이 검사 된 물질에서 검출되었음을 의미하지만 신체에서 활성 감염이 발생하는지 여부는 설명하지 않습니다. 반면에 부정적인 결과는 신체에 박테리아의 존재를 배제하지 않습니다.
일부 실험실에서는 진드기에 보렐리 아 DNA의 존재 여부를 검사합니다. 그러나 그러한 검사의 결과는 물린 사람의 라임 병 진단의 기초가 아닙니다.
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PCR은 매우 민감한 방법이며 동시에 오염에 매우 민감합니다. 따라서 PCR 기반 테스트에서 오탐을 배제하기 위해 적절한 내부 대조군을 선택하는 것이 매우 중요합니다.
핵심은 테스트를위한 올바른 자료 수집과 테스트를 수행하는 진단사의 경험과 신뢰성입니다.
PCR-결과. 거짓 음성 일 수 있습니까?
다른 실험실 테스트와 마찬가지로 PCR 방법에서도 위음성 결과가 나타날 수 있습니다. 헤파린과 같은 일부 항응고제는 PCR 반응을 억제 할 수 있기 때문에 적절한 항응고제를 위해 혈액을 수집하는 것이 중요합니다.
또한 항생제 치료 시작 후 물질을 수집하면 PCR 반응의 효율성이 떨어지고 위음성 결과가 발생할 가능성이 높아질 수 있습니다.
또한 Borrelia 박테리아는 혈액과 체액에서 매우 짧은 시간 동안 살아 간다는 사실을 기억해야합니다. 특수 수용체 덕분에 그들은 신체의 "도달하기 어려운"곳으로 매우 빠르게 침투하기 때문입니다.
따라서 다른 미생물의 진단과 달리 생물학적 물질의 Borrelia spirochetes의 수는 적으며 때로는 PCR 방법의 검출 한계에서도 적습니다. 이것은 또한 거짓 부정을 유발할 수 있습니다.
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- Dunaj J. et al. Lyme borreliosis의 진단에서 PCR 방법의 중요성. 검색 Epidemiol. 2013, 67, 119-123.
- 진드기 매개 질병의 실험실 진단. 작업 그룹의 권장 사항 : 국립 실험실 진단 회의소, 국립 공중 보건 연구소-국립 위생 연구소, 감염 질환 분야의 국립 컨설턴트, 감염성 질환 및 신경 감염 국, Białystok 의과 대학, 폴란드 바이러스 학회, 바르샤바 2014.
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